Jensen Ross Ackles est le fils de l'acteur Alan Roger Ackles et de Danna Joan Shaffer. Il débute très tôt sa carrière artistique en tant que mannequin dès l’âge de 4 ans. Activité qu'il continuera jusqu’à ses 10 ans. En 1996, il obtient son bac au lycée Lloyd V. Berkner de Richardson (Texas). Il prend des cours d’art dramatique et s’installe à Los Angeles pour mettre toutes les chances de son côté.
Il s'est marié à Dallas au Texas, le samedi 15 mai 2010 avec l'actrice Danneel Harris. Jared Padalecki, son meilleur ami, était présent au mariage.
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